T細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境，使T細(xì)胞能夠生存、生長和繁殖的***種技術(shù)。在T細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞被置于無菌、適宜溫度、酸堿度和***定營養(yǎng)條件的環(huán)境中，以保持其活力和功能。T細(xì)胞培養(yǎng)被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、生物醫(yī)學(xué)和藥物研發(fā)等領(lǐng)域，是研究T細(xì)胞功能、探索免疫反應(yīng)機(jī)制的重要手段。通過T細(xì)胞培養(yǎng)，科學(xué)***可以觀察和分析T細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及細(xì)胞因子分泌等過程，了解其在免疫應(yīng)答中的作用。同時(shí)，T細(xì)胞培養(yǎng)也為疾病治-療和預(yù)防提供了新的思路和手段，如免疫療法、疫苗研發(fā)和細(xì)胞治-療等。

T細(xì)胞培養(yǎng)的原理是通過復(fù)合抗體孵育標(biāo)記脾-臟細(xì)胞中除T細(xì)胞以外的其他細(xì)胞，再用磁珠結(jié)合抗體，然后用磁極吸附磁珠，那剩下的就是沒有結(jié)合磁珠的T細(xì)胞了。

t細(xì)胞培養(yǎng)方法包括以下步驟：

①抗體包被培養(yǎng)板：用無菌PBS制備5~10 μg/mL的CD3抗體，然后在96孔板的條件孔中，每孔加入50 μL抗體溶液。

②接種細(xì)胞：在抗體包被的培養(yǎng)板中接種T細(xì)胞，然后將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱中2小時(shí)或者提前***天準(zhǔn)備培養(yǎng)板，置于4℃過夜。

③洗滌和消化：在接種細(xì)胞之前，用移液槍將培養(yǎng)孔中的50 μL抗體吸出，然后用200 μL PBS洗滌培養(yǎng)孔并棄去PBS。重復(fù)此步驟以去除所有未交聯(lián)的抗體。

④細(xì)胞消化：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶豎立放置，吸走培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基中的脫落細(xì)胞較多，說明細(xì)胞現(xiàn)在很容易脫落，只要加入1ml的PBS+EDTA（0.02%），來回輕微晃動(dòng)培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞完全脫落，加入10mlMEM，混勻，不能吹打，分裝2瓶。如果細(xì)胞沒長滿就脫落，則只需加入5mlMEM，不分裝。如果培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞貼壁較牢固，培養(yǎng)基上清沒有細(xì)胞脫落碎片，且細(xì)胞長滿達(dá)到80％以上，吸走培養(yǎng)基，加入5ml的PBS+EDTA（0.02%），迅速輕微晃動(dòng)，豎立培養(yǎng)瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超過3min，細(xì)胞完全消化脫壁，取出加入10ml培養(yǎng)基輕微吸打混勻，分裝2瓶。

⑤培養(yǎng)：將分裝的T細(xì)胞接種到新培養(yǎng)瓶中，通常T25加10~12ml培養(yǎng)基培養(yǎng)，2~3天左右換液***次，若培養(yǎng)基變黃及時(shí)換液，以維持***個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的培養(yǎng)條件，有利于細(xì)胞活正常生長。

不管是我們實(shí)驗(yàn)室中常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)，還是臨床上的CAR-T細(xì)胞治-療等，提高T細(xì)胞的增殖和持久性，以及增強(qiáng)細(xì)胞再免疫抑-制性TME中的功能，都離不開細(xì)胞因子。

細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞（如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等）和某些非免疫細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等）經(jīng)刺激而合成、分泌的***類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長、APSC多能細(xì)胞以及損傷組織修復(fù)等多種功能。

細(xì)胞因子可被分為白細(xì)胞介素(IL)、干擾素(IFN)、腫瘤壞死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、趨化因子、生長因子(GF)等。

細(xì)胞因子γ鏈共受體***族包括IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21，它們在T細(xì)胞分化、增殖和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中起著關(guān)鍵作用。他們受體包括共同的γ鏈（γc）和***個(gè)各自單獨(dú)的受體鏈，下游信號(hào)激活STAT信號(hào)通路。

(文章來源于儀器網(wǎng))